Enzimas

Por el Ing. Agr. Carlos A. González


Recordemos las reacciones endergónicas y exergónicas:

 Para armar una molécula hacen falta muchos elementos, a saber:

1.     Materia prima con la cual construir

2.     Operarios especializados: las enzimas

3.     Transferencia de electrones y de materiales preelaborados (dentro o fuera de la célula)

4.     Energía para unir los átomos en las combinaciones deseadas.

 

Las enzimas son las moléculas responsables de "elegir" entre una enorme cantidad de reacciones posibles, cuáles de ellas van a ocurrir y cuáles no.

 

¿Cómo se maneja la energía con las enzimas?

 

Las enzimas, en su calidad de catalizadores biológicos, disminuyen la energía de activación de determinadas reacciones químicas. Esto quiere decir: logran que sea necesaria una menor cantidad de energía inicial para que una cierta reacción se produzca, y esto lo hacen al combinarse con ciertas moléculas biológicas, seleccionando así, entre varias alternativas, cuál será la vía que se seguirá.

 

Características de las enzimas:

·         Actúan en baja concentración

 

Teoría sobre la actividad enzimática:

 ¿Cómo actúan las enzimas?

  Sustrato + Enzima ------> (Enzima-Sustrato)-------> Producto

 

 

¿Cómo se establece la unión específica de la enzima con su sustrato?

·         El sitio Activo:

En las enzimas existe una zona o surco que comparte cierta complementariedad tridimensional con el sustrato. En este surco existe complementariedad de cargas o de densidades de carga, con el sustrato; lo cual depende de los aminoácidos que queden en esa zona que, a su vez corresponderá, en últimas instancia, a la estructura primaria de la proteína.

 

·         Características del sitio activo:

1.     Responde a una porción relativamente pequeña del volumen total de la enzima.

2.     Es una entidad tridimensional.

3.     Los sustratos se unen a las enzimas por numerosas fuerzas débiles.

4.     Presentan forma de surco o hendidura

5.     La especificidad depende de la disposición exactamente definida de los átomos del centro activo.

 

Cofactores:

Son sustancias de características no proteicas que, actúan junto con la enzima y el sustrato, en algunas reacciones.

 

Estas sustancias:

·         no se modifican al finalizar la reacción,

 

Tipos de cofactores:

·         Iones: manejan las cargas de los sitios activos. Ej.: Mg es cofactor de las enzimas que transfieren grupos fosfato.

Haloenzima = Apoenzima + Grupo prostético

Ej.: En las catalasas y peroxidasas de los peroxisomas, es el Hemo.

Las flavinas (FAD, FMN).

 

Mecanismos de regulación de la actividad enzimática:

Las enzimas están reguladas en las vías metabólicas de un modo coordinado y económico, ajustándose a las necesidades de la célula.

 

Objetivos de la regulación:

1.     Producir los metabolismos necesarios y en la cantidad adecuada cuando son requeridos. (máx. economía).

2.     Aprovechar la energía disponible en forma eficiente.

3.     Mantener un control de las fuentes energéticas.

4.     Mantener un nivel adecuado de ATP.

 

Factores que afectan la cinética enzimática:

 

La cinética de una reacción se refiere a la velocidad de dicha reacción a medida que transcurre.

 

La reacción se puede medir: la cantidad de Producto formado en cada unidad de tiempo (por minuto).

 

Los fenómenos que afectan la cinética enzimática son:

 

A.   Efectos de la temperatura

B.    Efectos del pH

C.   Efectos de la concentración del sustrato

D.   Efectos de la concentración de cofactores

E.    Interacción con los activadores e inhibidores

1.     Inhibidor irreversible

2.     Modulación reversible

a.      A nivel del sitio activo

b.     En otro sitio diferente al sitio activo

Existen otros niveles de regulación:

 

F.     Interconversión de formas enzimáticas

G.   Control genético

a.      Enzimas induscibles.

b.     Enzimas constitutivas.

H.   Control Hormonal


 

A.   Efecto de la Temperatura:

 

A Mayor (de la óptima), mayor desestabilización de las estructuras (desnaturalización).

A Menor ( de la óptima), mayor rigidez de las uniones débiles (menor flexibilidad conformacional).

 

B.    Efectos del pH

 

¿Cómo influye el pH en una enzima?

 

·         Se altera se la estructura, por ionización de su grupos R en los aa.

 

Algunas enzimas muestran rangos de trabajo a temperaturas específicas y otras le es indiferente.

 

C.   Efectos de la Concentración de sustratos:

·         Concentración de Saturación

 

 

 Km de una enzima es:

"La concentración de sustrato para la cual la velocidad de reacción corresponde a la mitad del valor de la velocidad máxima".

 

D.   Concentración de Cofactores:

La enzima que precisan de cofactores para ser activadas se verán limitada su actividad a la presencia de estos cofactores en concentraciones adecuadas.

A Menor cantidad de cofactores, Menor es la cantidad de productos.

 

E.    Interacción con activadores o inhibidores:

 

1.     Inhibición irreversible.

 

 

. Modificación del sitio activo

. Inhibición de tipo covalente.

Ej.: Penicilina. Metales pesados. Organofosforados (DDT, DFT),

 

2.     Modulación reversible:

 

a.      a nivel del sitio activo:

. La interacción con el sitio activo, es competitivo

. Depende de la concentración de sustrato o de inhibidor.

En la inhibición competitiva la velocidad máxima de la reacción no varía, pero se necesitan concentraciones más elevadas de sustrato para alcanzar una determinada velocidad, incrementándose así la Km aparente.

Inhibición reversible competitiva.

Ej.: Etilenglicol., Propolio

 

b.     En otros sitios diferentes al sitio activo:

1.     Inhibición reversible no competitiva en enzimas Michaelianas.

Son sustancias que actúan fuera del sitio activo, pero alteran la conformación tridimensional del mismo, disminuyendo la afinidad por el sustrato. Ej.: Sustancias metabólicas (H2O2).

 

2.     Modulación reversible no competitiva en enzimas alostéricas:

Las enzimas alostéricas poseen un sitio receptor llamado sitio alostérico. Estas enzimas poseen más de una cadena polipectídica a cada una de las cuales corresponde un sitio activo. El sitio alostérico suele localizarse en la unión de los polipectidos.

 

 

Estas enzimas presentan un efecto cooperativo: la unión de un sustrato a unas de las subunidades de la enzima, facilita la unión de las demás moléculas de sustrato a los sitios activos de otras subunidades.

Si un sustrato forma un enlace covalente con un sitio distinto del activo, ello puede estimular la actividad de la enzima o bien inhibirla. La sustancia que se une a la enzima alostérica se llama regulador o modulador o efector.

 

 

* + la afinidad por el sustrato aumenta, y el efecto cooperativo se reduce.

* - la afinidad por el sustrato disminuye, y el efecto cooperativo aumenta.(provocando la necesidad de una [ S ] mucho mayor para alcanzar una determinada velocidad).

·         Existen algunas enzimas que presentan un solo sitio activo y varios sitios alostéricos en una sola cadena polipeptídica, dependiendo su actividad del balance de los tipos de efectores que se unan.

Debemos tener claro....

a.       Que una enzima alostérica puede ser regulada por una inhibición competitiva.

  1. Que una enzima alostérica con efector positivo, pueden llegar a uniese a su sustrato en ausencia del modulador, aunque con baja afinidad.
  2. Que una enzima alostérica con efector negativo en ausencia del modulador.

 

¿Cómo controla la velocidad de la vías metabólicas?

¿Cómo se hará para acelerar o retardar las reacciones metabólicas en la célula en función de las necesidades?

Por medio de:

Feddback negativo o inhibición por producto final.

Feddback positiva o activación por precursor.

 

A.   Interconversión de formas enzimáticas:

·         Enzimas que se pueden presentar en dos formas: activa o inactiva.

a.      covalente por otra enzima,

b.     por otra proteína: Calmodulina

c.      Por alguna sustancia específica que producen un clivaje en una cadena polipeptídica, dejando libre el sitio activo (enzimas proteolíticas).

·         Las modificaciones son reversibles.

* Calmodulina(sensor de Ca en células eucariontes).

·         El pepsinógeno (zimógenos) se activa por pH ácido del estomago, como pepsina. El tripsinógeno se produce en el páncreas se activa en el intestino con pH alcalino como tripsina.

 

G.   Control genético:

·         Enzimas constitutivas:

Son aquellas en que las células las fabrica todo el tiempo. Siempre están allí en niveles "basales". Esté o no el sustrato en ese momento. Ej.: las enzimas de la vía glucolítica.

·         Enzimas inducibles:

Son aquellas enzimas que se sintetizan cuando su sustrato está presente en la célula.

·         Regulación génica de los procariontes:

1.     Los genes codificadores (operón) están muy próximos entre sí.

2.     Se encienden y apagan al unísono.

3.     El gen que controla el conjunto de genes se llama operador (interruptor).

4.     El gen que acciona el interruptor se llama gen regulador. Este produce una proteína represora.

5.     El represor se adhiere, al operador y de esa manera lo mantiene en posición de apagado.

6.     Cuando en el medio hay cierta sustancia, estar reaccionan con el represor e impide que se adhiere el operador.

7.     El resultado es que el operón deja de estar reprimido y se enciende. Frente a esta situación, la ARN polimerasa, que se fija a un sitio del promotor, queda en libertad para iniciar la transcripción.

8.     La sustancia que nulifica al represor se denomina inductor.

Ej.: Operón lactosa y Operón histidina (fig.1).

Fig. 1

 

Enzimas:

Beta-galactosidasa: rompe la lactosa en glucosa y galactosa.

Permeasa: facilitas el paso de la lactosa al interior de la célula bacteriana.

Transacetilasa: promueve la transferencia de un grupo acetilo del acetil-oA a la galactosa, sin participar directamente en el procesamiento de la lactosa.

 

Las funciones de los represores, tanto activos como inactivos, es un ejemplo de los mecanismos de control negativo de la expresión génica; sin embargo, también existe mecanismos positivos de control.

Por ejemplo positivo para el operón lactosa se relaciona con una proteína llamada CAP (proteína fijadora del AMP cíclico) capaz de combinarse con el AMP cíclico (sustancia mensajera que media los efectos de muchas hormonas sobre la actividad celular).

1.     En presencia de AMP cíclico, la CAP se localiza en el sitio promotor del ADN.

2.     Cuando esta proteína se fija al AMP y se adhiere al promotor, altera la conformación de éste último y, de ese modo, aumenta la capacidad del promotor para fijarse a la ARN polimerasa.

3.     En presencia de glucosa (fuente de energía directa), las concentraciones de AMP cíclico son bajas y los CAP no se fijan al sitio promotor, no activando la ARN polimerasa.

4.     Cuando las concentraciones de la lactosa es alta y en ausencia de glucosa, la concentración de AMP cíclico se eleva y este forma un complejo con el CAP, la cual se adhiere posteriormente al sitio promotor del operón lactosa activándolo.

·         Regulación génica de los eucariontes:

La regulación de estos individuos es más compleja aún, existiendo diferencias cualitativas y cuantitativas.

¿Porqué?

1.     El número de genes en el genoma total de los eucariotas es hasta 800 veces mayor que el de los procariotas.

2.     En una célula eucariota, perfectamente el 99 % de los genes potenciales pueden estar apagados.

3.     El material genético traducible del eucariota está interrumpido por secuencias intermedias que no se expresan.

Sabía que ...

muchos de los segmentos de ADN que participan en la codificación de las proteínas están interrumpidos por segmentos de nucleótidos que carecen de información genética. Las bandas codificadoras se llaman exones, mientras las regiones no codificadoras se conocen como intrones. En general, los genes están divididos en partes intrónicas y exónicas aproximadamente iguales, aunque en algunos casos las partes intrónicas son superiores.

El ARN inmaduro formado a partir del ADN no es el mismo que pasa a través de la membrana nuclear, pues se retiran los tramos que no codifican y se unen los tramos que sí codifican (exones) formando la cadena de ARN maduro que pasa al citoplasma.

 

H.  Control hormonal:

Este sistema de control es específico de los individuos pluricelulares, poseen sistemas endócrinos, productores de hormonas.

Las hormonas son mensajeros químicos producidos por glándulas especiales, que viajando vía sanguínea a un determinado lugar (tejidos, órganos, etc.) donde cumple su función. Para que dicha función pueda ser desarrollada, el lugar de destino debe presentar receptores específicos (glucocalix).

Las hormonas por sus características químicas (hidrosoluble o liposoluble) deben llevar el mensaje y transmitirlo al interior de la célula de dos formas diferentes.

A) Para el caso de las liposolubles (ej. Esteroides), atraviesan las membranas se unen a una proteína receptora dentro del

citoplasma y el complejo resultante ingresa en el núcleo donde ocurre el efecto sobre el aparato genético.

B) En el caso de las hidrosolubles, se deben fijar previamente a un receptor específico presente en la membrana celular. Pero para pasar el mensaje al interior se necesita de un segundo componente que sea cómplice y que se encuentra en el interior de la célula: el AMP cíclico ( en otros casos el ion calcio, el inositol trifosfato o el GMP cíclico teniendo el mismo propósito). El mecanismo es el siguiente (fig.3):

1.     La hormona se adhiere al receptor membranoso.

2.     El traslado de la señal a través de la membrana se lleva a cabo por una proteína llamada proteína transductora ( proteína G).

3.     Se activa una enzima que se encuentra sobre la cara que da hacia el citoplasma llamada: adenilato ciclas. Esta enzima quita dos fosfatos al ATP, produciendo AMP cíclico, que actúa como segundo mensajero enviando el mensaje al citoplasma.

4.     A partir de este punto se desencadena una serie de reacciones en la célula.

5.     Luego otra enzima, la fosfodiesterasa, degrada el AMP cíclico a AMP sencillo, terminando así la acción hormonal. Más tarde el AMP es reciclado a ATP.

Fig.3

 

Por lo general, este mecanismo de acción hormonal (B) es más veloz que los mecanismos que implican una modulación del genoma (A). La modulación de la actividad génica puede consistir en un incremento de la transcripción o de la traducción.

Tipos de enzimas:

El nombre de la enzima consta de dos partes. La primera corresponde al nombre del sustrato - o -, la segunda, que termina en "asa", al tipo de reacción que cataliza.

Las enzimas se clasifican en seis clases:

a.      Oxido-reducción: reacciones redox. Ej.: deshidrogenasas.

b.     Transferasas: transfieren grupos funcionales de una molécula a otra. Ej.: transaminidasas

c.      Hidrolasas: introducen moléculas de agua en uniones específicas de sustratos. Ej.: amilasas

d.     Descarboxilasa: eliminas CO2 de la moléculas.

e.      Liasas: Eliminan un grupo del sustrato dejando una doble ligadura o adicionan un grupo a una doble ligadura.

f.       Isomerasas: Reordenan al sustrato.

g.      Ligasas: unen dos moléculas entre sí con obtención de la unión pirofosfato del ATP o de otro nucleótido trifosfato.

 


Sabia que ...

Hace pocos años, se desarrolló un descubrimiento relacionado con enzimas de ARN (llamada ribozimas). Se trata de una molécula de ARN procedente del intrón de un ARN ribosómico autoenzamblado de un protozoo ciliado que actúa como una ribonucleasa y una ARN polimerasa. Esta enzima demuestra un alto grado de especificidad, cinética de Micheaelis y susceptibilidad a la inhibición competitiva. En la evolución, las enzimas de ARN pueden preceder a las enzimas proteicas.


 

Volver